小動物活體成像技術(shù)為生命科學(xué)研究提供了無創(chuàng)、動態(tài)觀察生物過程的強(qiáng)大工具。然而，要獲得科學(xué)、可靠且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的結(jié)果，嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膶?shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)至關(guān)重要。其中，對照設(shè)置、時間點(diǎn)選擇和樣本量規(guī)劃是確保實(shí)驗(yàn)成功與結(jié)論可信的三大基石。
一、對照設(shè)置：
對照組是實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的“標(biāo)尺”，用于排除非特異性信號和系統(tǒng)誤差。
陰性對照：這是較核心的對照。例如，在研究腫瘤生長時，應(yīng)設(shè)置未接種腫瘤細(xì)胞的健康動物作為陰性對照，以確認(rèn)背景信號(如自發(fā)熒光)水平。在基因治療研究中，注射空載體或無關(guān)序列的動物可排除載體本身的影響。
陽性對照：用于驗(yàn)證成像系統(tǒng)和模型的有效性。例如，在測試一種新的抗腫瘤藥物時，可設(shè)置一個已知有效的陽性藥物組，確保實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)能檢測到預(yù)期的治療效果。
空白對照(僅適用于熒光成像)：對于使用外源性熒光探針的實(shí)驗(yàn)，需設(shè)置未注射探針但其他處理相同的動物，以評估組織自發(fā)熒光的干擾。
假手術(shù)/處理對照：當(dāng)實(shí)驗(yàn)涉及手術(shù)或特殊處理時，需設(shè)置僅進(jìn)行相同操作但不實(shí)施關(guān)鍵步驟(如不注射細(xì)胞、不結(jié)扎血管)的對照組，以排除操作本身造成的應(yīng)激反應(yīng)。
二、時間點(diǎn)選擇：
活體成像的優(yōu)勢在于其動態(tài)性，合理選擇時間點(diǎn)能完整描繪生物過程的演變。
基線掃描：在干預(yù)(如給藥、接種)前進(jìn)行初次掃描，獲取每個動物的本底信號，用于后續(xù)的自身對照和數(shù)據(jù)歸一化。
動態(tài)監(jiān)測：根據(jù)研究目標(biāo)的生物學(xué)過程速度來設(shè)定。急性過程(如炎癥、藥物分布)可能需要分鐘或小時級別的密集掃描；慢性過程(如腫瘤生長、神經(jīng)退行)則需數(shù)天、數(shù)周甚至數(shù)月的定期監(jiān)測。關(guān)鍵是要覆蓋過程的起始、高峰和消退(或穩(wěn)定)階段。
終點(diǎn)驗(yàn)證：實(shí)驗(yàn)結(jié)束時，通常需要進(jìn)行組織學(xué)、分子生物學(xué)等離體分析，將活體成像結(jié)果與“金標(biāo)準(zhǔn)”進(jìn)行關(guān)聯(lián)驗(yàn)證。
三、樣本量規(guī)劃：
樣本量過小，統(tǒng)計(jì)效力不足，可能無法檢測到真實(shí)差異(假陰性)；樣本量過大，則違背3R原則(減少、優(yōu)化、替代)。應(yīng)基于預(yù)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，使用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法(如功效分析)計(jì)算所需樣本量。需考慮預(yù)期效應(yīng)大小、數(shù)據(jù)變異性(標(biāo)準(zhǔn)差)和可接受的顯著性水平(α)與統(tǒng)計(jì)功效(1-β)。通常，每組5-10只動物是常見范圍，但具體需根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)嚴(yán)謹(jǐn)計(jì)算。
精心設(shè)計(jì)的對照、科學(xué)規(guī)劃的時間點(diǎn)和合理計(jì)算的樣本量，是小動物活體成像研究從“好看圖片”走向“可靠科學(xué)發(fā)現(xiàn)”的必經(jīng)之路。忽視這些原則，再先進(jìn)的儀器也難以產(chǎn)出高質(zhì)量的科研成果。
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